swant 235說(shuō)明書
產(chǎn)品：抗小清蛋白單克隆抗體
代碼編號(hào)：235
批號(hào)：10-11(F)
表格：凍干腹水（不含防腐劑）。
數(shù)量：200µl
復(fù)溶：用200µl重蒸餾水。
單克隆抗小清蛋白是一種小鼠IgG1，由小鼠骨髓瘤細(xì)胞與用純化自 鯉魚肌肉(1)。評(píng)價(jià)抗體的特異性和效價(jià)：a）通過(guò)間接免疫熒光或免疫過(guò)氧化物酶標(biāo)記以及4%多聚甲醛固定組織的冰凍切片機(jī)或振動(dòng)切片機(jī)切片的抗生物素蛋白-生物素染色；b）通過(guò)免疫印跡的免疫酶標(biāo)記；c）通過(guò)放射免疫測(cè)定法(RIA)(1)。
該產(chǎn)品是一種抗小清蛋白的單克隆抗體(McAB)，小清蛋白是一種與鈣調(diào)蛋白和肌鈣蛋白C相關(guān)的EF手家族鈣結(jié)合蛋白。該抗體與人、猴、兔、大鼠組織中的小清蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)。 小鼠雞和魚。McAB在二維“免疫印跡”中特異性染色小清蛋白的45Ca結(jié)合點(diǎn)（MW 12'000和IEF 4.9）。在RIA設(shè)置中，McAB測(cè)量小清蛋白的靈敏度為10 ng/檢測(cè)，親和力為7.9 x 1012 L/M(1)。
鈣結(jié)合蛋白代表一個(gè)小的酸性蛋白家族，配備有特殊的空腔，以高選擇性接受Ca2 +。鈣結(jié)合蛋白有兩種類型，“觸發(fā)”和“緩沖”蛋白。“觸發(fā)”型（例如鈣調(diào)蛋白和肌鈣蛋白C）通過(guò)改變結(jié)合Ca2 + 的形狀發(fā)揮作用。這種失真暴露了蛋白質(zhì)表面的區(qū)域，這些區(qū)域與周圍的靶分子相互作用，改變了它們的活性。“緩沖液”型的鈣結(jié)合蛋白被認(rèn)為是一個(gè)負(fù)責(zé)控制細(xì)胞內(nèi)Ca2 + 濃度的系統(tǒng)。小清蛋白主要存在于神經(jīng)細(xì)胞亞群(2，4)和快肌纖維(3)中。它可能賦予這些細(xì)胞處理鈣離子的特殊技能。小清蛋白是一種有吸引力的神經(jīng)解剖學(xué)工具，這種McAB保證了
持續(xù)產(chǎn)生具有相同特異性和化學(xué)特性的恒定滴度的抗小清蛋白抗體。
針對(duì)小清蛋白的McAB 235使用自由漂浮或安裝的大腦和肌肉部分（可能是所有脊椎動(dòng)物的部分）特異性定位小清蛋白。固定似乎不妨礙抗原的檢測(cè)，因?yàn)榧词故?.5%戊二醛也與半?。?.5µm?。├鋬銮衅系拿庖叨ㄎ幌嗳?。 大鼠皮質(zhì)(4)?？膳c大鼠-小清蛋白作為示蹤劑定量各種屬腦內(nèi)小清蛋白[1]。
通過(guò)腦和肌肉提取物的免疫印跡可以確定抗體235的特異性[1]。然而，該抗體在SDS-凝膠電泳后不能很好地識(shí)別小清蛋白分子。
抗體235免疫可高效標(biāo)記正常大腦中的神經(jīng)元亞群（圖2a），但不會(huì)染色小清蛋白基因敲除小鼠的大腦（圖2b）。
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圖2a：McAB 235免疫組化染色在 對(duì)照小鼠的海馬。注意II-VI層中間神經(jīng)元的強(qiáng)染色。×100 | 圖2b：小清蛋白基因敲除小鼠大腦皮層中不存在McAB 235的免疫組織化學(xué)染色(5)?？剐∈蠖挂鸬难鼙诜翘禺愋匀旧?times;100 |
免疫組織化學(xué)：1:5'000-1:10'000
免疫印跡法：1:1’000。
我們建議通過(guò)滴定試驗(yàn)確定宜稀釋度。
對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，將1-2µl的小等份試樣保存在-80 ℃（或至少-20 ℃）下。連續(xù)使用時(shí)，稀釋溶液在4 ℃下保存（含0.01%疊氮化納）。避免反復(fù)凍融。
5. Schwaller B.等。(1999)Am.J.生理學(xué)。276.C395-403
