biochain epoc培養(yǎng)說明

一、MEPOC生長培養(yǎng)基的制備

我們推薦使用Biochain的MEPOC生長培養(yǎng)基（CAT Z7030033）培養(yǎng)我們的MEPC。

一。在室溫水浴中解凍MEPOC生長介質(zhì)補(bǔ)充劑（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培養(yǎng)基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整個(gè)體積（25 ml）的EPOC生長培養(yǎng)基補(bǔ)充劑，制備Mepoc生長培養(yǎng)基。生物鏈的mepoc生長培養(yǎng)基不含抗生素，但如果擔(dān)心污染，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加熱部分mepoc生長介質(zhì)。

二。解凍冷凍細(xì)胞

一。在37°C水浴中加熱EPOC生長培養(yǎng)基。

2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞。

三。將細(xì)胞懸液無菌轉(zhuǎn)移到15ml試管中。用1毫升生長培養(yǎng)基沖洗小瓶，并在15毫升試管中與細(xì)胞混合。以170克（或1400轉(zhuǎn)/分）的速度離心5分鐘，使細(xì)胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yǎng)基，置于t25燒瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)物顯示紡錘體形態(tài)，培養(yǎng)2-3天后細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍。

三、亞培養(yǎng)細(xì)胞

一。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到100%匯合時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

2.在通過細(xì)胞前一天更換培養(yǎng)基。

三。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長培養(yǎng)基。

四。用Dulbecco的PBS沖洗細(xì)胞。

5個(gè)。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培養(yǎng)細(xì)胞3-5分鐘，直到大約90%的細(xì)胞開始分離。輕輕地填充血管使細(xì)胞分離。

6.加入相當(dāng)于胰蛋白酶/EDTA體積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，輕輕搖動培養(yǎng)管混合。

7號。輕輕地重新懸浮細(xì)胞，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml錐形管中。

8個(gè)。在室溫下將細(xì)胞懸液在170 x g下離心5分鐘。

9號。小心地去除上清液，不要干擾細(xì)胞顆粒。在生長培養(yǎng)基中重新懸浮細(xì)胞。

10個(gè)。將它們按1:5的比例放入新的培養(yǎng)皿中。

11號。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。每隔一天換一次。

iv.在充滿mepoc生長培養(yǎng)基的t25、t75、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

當(dāng)燒瓶到達(dá)時(shí)：

一。從燒瓶中倒出大部分培養(yǎng)基，并在燒瓶中留適量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。第二天換成中號，以后每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)基在培養(yǎng)2-3天后，紡錘形細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍。